我國測定葉綠素a的方法主要有分光光度法和熒光分光光度法,環(huán)境保護部發(fā)布的《HJ 897-2017 水質(zhì) 葉綠素a的測定 分光光度法》、水利部頒布的“水質(zhì)葉綠素的濃度測分光光度法(SL88-1994現(xiàn)已廢止被SL88-2012代替)及海洋監(jiān)測規(guī)范第7部分:近海污染生態(tài)調(diào)查和生物監(jiān)測GB17378.7-2007。其中SL88-1994與《水和廢水監(jiān)測分析方法》(第四版增補版)中“葉綠素a的測定方法”在樣品處理和計算公式都相同,屬干丙酮研磨萃取法。而SL88-2012與GB17378.7-2007在樣品處理和計算公式相同,屬于丙酮反復凍融-浸提法。
我們的采用了熒光檢測技術(shù),該技術(shù)是利用浮游植物體內(nèi)的葉綠素受特定波長的光激發(fā)后產(chǎn)生的熒光與其濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系的原理,因此通過檢測浮游植物中葉綠素a發(fā)出的熒光強度即可實現(xiàn)對浮游植物的定量測定。 水質(zhì)葉綠素a分光光度法的采集、保存和測定 1、樣品采集:樣品的采集一般使用有機玻璃采水器或其他適當?shù)牟蓸悠鞑杉嫦?.5m樣品,湖泊、水庫根據(jù)需要可進行分層采樣或混合采樣,采樣體積為1L或500ml。如果樣品中含沉降性固體( 如泥沙等), 應(yīng)將樣品搖勻后倒入2L量筒,避光靜置30min,取水面下5cm樣品,轉(zhuǎn)移至采樣瓶。在每升樣品中加入1ml碳酸鎂懸濁液, 以防止酸化引起色素溶解。 注:如果水深不足0.5m.在水深1/2處采集樣品,但不得混入水面漂浮物。 2、樣品保存:樣品采集后應(yīng)在0C~4C避光保存、運輸,24h內(nèi)運送至檢測實驗室過濾(若樣品24h內(nèi)不能送達檢測實驗室,應(yīng)現(xiàn)場過濾,濾膜避光冷凍運輸),樣品濾膜于-20C避光保存,14d內(nèi)分析完畢。 注:樣品采集后,如條件允許,宜盡快分析完畢。 3、樣品測定:將一定量樣品用濾膜過濾截留藻類,研磨破碎藻類細胞,用丙酮提取葉綠素,離心后于特定波長下測定提取液吸光度,根據(jù)公式計算水中葉綠素a濃度。
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